1.自新鲜划痕挑选培育板中别离单菌落，接种含恰当挑选性抗生素的1-5ml的LB培

  养基进行培育。37℃强力摇摆（~300rpm）孵育12-16h。运用10-20ml培育管或容量至少4

  倍于培育容积的培育瓶。强烈推荐运用endA阴性大肠杆菌菌株进行惯例质粒别离。此类菌

  3.参加250μl的溶液I/RnaseA重悬沉积，涡旋或用移液器重复吹打。充沛重悬沉积

  4.参加250μl溶液II，倒置、滚动试管数次使之悄悄混匀，得到通明的裂解产品。可

  能需求孵育2min。不要用力混合，防止使染色体DNA开裂，减低质粒的纯度。该步反响

  不要超越5min。溶液II不用时要拧紧瓶盖，防止试剂被空气中的CO2酸化。

  5.参加350μl溶液III，当即倒置试管数次混匀，直至白色絮状沉积物构成。为防止

  6.室温≥10,000xg离心10分钟。白色沉积物构成，当即进行下一步操作。

  淀未受扰动，确保没有细胞碎片参加到柱子中。室温下10,000xg离心1分钟，使裂解液完

  8.丢掉滤过液，从头运用2ml搜集管；参加500μlHB缓冲液清洗柱子，室温10,000x

  g离心1分钟，使溶液完结经过柱子。该步操作需确保剩余的蛋白质污染被去除，以确保获

  9.丢掉滤过液，从头运用2ml搜集管；参加700μl用无水乙醇稀释的DNA清洗液清

  洗柱子，室温10,000xg离心1分钟，使溶液彻底经过柱子，丢掉滤过液。

  留意：DNA清洗液的浓缩液运用前必须用无水乙醇稀释（5倍稀释），假如DNA清洗

  10.可选过程：重复清洗，参加别的的700μl用无水乙醇稀释的DNA清洗液。

  11.将空柱子≥13,000xg离心2min，使柱子的基质枯燥。此过程为要害操作，不行遗

  12.将柱子放入洁净的1.5ml微量离心管中。将30-50μl（取决于终产品的希望浓度）

  洗脱液或无菌去离子水直接参加柱子基质上，使之于室温下静置1-2min。≥13,000xg离心

  13.DNA的产值和质量：分别在波长260nm和280nm处测定样品恰当稀释液的吸光度。

  的比率可以反映核酸的纯度。比值大于1.8标明核算的纯度在90%以上。或许，

  DNA的产值（及质量）有时可以终究靠琼脂糖胶/溴乙锭电泳与已知浓度的DNA样品相比较

  更好的予以确认。通常情况下洗脱的大部分DNA是超螺旋单体方式，但也有几率存在串联体