4、设置样本孔、阴性对照孔和空白孔，样本孔加待测样本 50μL，阴性对照孔加酶标稀

  释液 50μL，空白孔不加，用封板膜盖住反响板，37℃水浴锅或恒温箱温育 30min。

  5、揭开封板膜，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 20s，甩去洗涤液吸水纸上拍干。如此重复 4 次（共洗板 5 次）。若运用主动洗板机，请按洗板机操作程序进行洗板，增加浸泡 20s 的程序，能大大的提高检测的精度。洗板完毕，加底物前，要在洁净不掉屑的纸上，充沛拍干反响板。

  6、除空白孔外，阴性对照孔和样本孔，参加辣根过氧化物酶符号的检测抗体 100μL。

  8、揭开封板膜，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 20s，甩去洗涤液，吸水纸上拍干。如此重复 4 次（共洗板 5 次）。若运用主动洗板机，请按洗板机操作程序进行洗板，增加浸泡 20s 的程序，能大大的提高检测的精度。洗板完毕，加底物前，要在洁净不掉屑

  9、将底物 A 和 B 按 1:1 体积充沛混合，一切孔中参加底物混合液 100μL。用封板膜盖住反响板，37℃水浴锅或恒温箱温育 15min。仅供科研运用，不得用于临床确诊。

  10、一切孔参加停止液 50μL，在酶标仪上读取各孔吸光度（OD 值）。