2、清洗：用去离子水先冲刷凝胶两次，每次 1 min，然后用很多去离子水重复漂洗凝胶 30 min。

  3、敏化：将凝胶浸泡在敏化液中，1-2 min。 4、清洗：去离子水洗刷凝胶两次，每次 10 s。 5、染色：以 0.1%的 AgNO3 溶液浸泡凝胶，轻摇 30 min。 6、清洗：去离子水漂洗 30 min。 7、显影：在显影液中震动直至呈现蛋白质的明晰条带。 8、停止：以 1%的冰醋酸溶液停止反响。

  起泡沫，定容时应在泡沫悉数退去后再定容，避免不精确） 3、10%过硫酸铵溶液 取 5g 过硫酸铵，用水溶解后，注入 50mL 容量瓶中，定容。 4、别离胶缓冲溶液 1.5mol/L pH=8.8 的 Tris-HCl 缓冲溶液：将 18.15g Tris 用 98mL 水溶解后，用浓盐酸调

  7、电极缓冲液 将 6g Tris，28.8g 甘氨酸和 1g SDS 加水溶解后，定容到 1000mL，pH 应为 8.3。 8、考马斯亮蓝染色法溶液制造 （1）染色液：称取 0.25g 考马斯亮蓝（G250），参加 45mL 甲醇、10mL 冰醋酸和 45mL 水，过滤后运用。 （2）脱色液（新制）：37.5mL 冰醋酸、25mL 甲醇加水到 500mL。 9、银染法溶液制造 （1）固定液：250 mL 甲醇，25 mL 冰醋酸，225 mL 水。 （2）敏化液：0.02%的 Na2S2O3 .5H2O 溶液。 （3）显影液：0.04%甲醛溶在 2%Na2CO3 中。 四、笔直电泳装置的拼装及胶的灌制。 1、松开本体上的螺栓，摆开左右滑块，放入两块玻璃板组成凝胶室，低板的一块板向内 （注：做一块板也要加上另一块板）。合上滑块，拧螺栓锁死凝胶室。 2、将上述组合放入制胶架，刺进并旋转凸轮固定。 3、灌入别离胶，至间隔上沿 3cm 处。参加约 1mm 厚的一层水，放置至胶凝，约 40min 左右。（胶要现灌现配，避免聚合） 4、别离胶凝结后，用滤纸吸干上层的水，制造积层胶，灌至上沿，插上木梳，放置约 2h，凝结。 五、加样品进行电泳 1、积层胶聚合完成后，当心拔下梳子，以去离子水洗刷 加样槽，除掉未聚合的聚丙烯酰胺。松开凸轮，取出本体组合放入下槽，参加 Tris-甘氨 酸电极缓冲液，充溢上下槽。 2、加样。用微量注射器按预订次序加样，每个样品的上样 10μL，每加完一个样品要在 去离子水中洗刷注射器。 3、将电泳装置安装上盖与电源衔接（正极应接下槽），开端电泳。在积层凝胶上加 80-100V 电压，待染料前沿进入别离胶后将电压提高到 180-200V 持续电泳，至溴酚蓝染料前沿抵达分 离胶的底部，封闭电源。（约 2.5h）。 六、染色

  （一）考马斯亮蓝染色 1、电泳完毕后，取出凝胶室，用多用取胶器撬开玻板取出凝胶，放入容器中，参加染色

  液，染色 1h。 2、将染色液倒入收回瓶中，以备下次运用，将脱色液倒入，浸泡脱色。必定时期（约

  2h）最好替换脱色液一次，直至条带清ຫໍສະໝຸດ Baidu。（约 2 天） （二）硝酸银染色

  蛋白质条带的银染是根据蛋白质中的各种基团与银离子结合，再利用甲醛使蛋白质带上 的银离子在碱性环境下被还原成金属银，沉积在蛋白质外表而显色。与考马斯亮蓝染色法相 比较，银染的灵敏度较高、操作简略快捷、染色显色所需时间短，过程如下：

  二、样品制备 各取样品 40μ L 于小离心管，参加 10μ L 样品缓冲溶液，混匀。沸水中加热 5min，待用。 Marker 取 40μ L，一同加热（可以用 4 次）

  三、各溶液的制造 1、30%丙烯酰胺混合溶液。 29g 丙烯酰胺，与 1g 甲叉双丙烯酰胺混合，定容到 100mL，过滤。 2、10% SDS 溶液 取 5g SDS，用水溶解后，注入 50mL 容量瓶中，定容。（SDS 为有机溶剂，在制造时易

  一、相关仪器和试剂的预备： （一）仪器： 1、笔直电泳仪（本体、洁净玻璃板、制胶架、梳子等）。 2、移液器：1000μ L、100μ L、10μ L 各一支及枪头若干。 3、一只洁净小烧杯和加热大烧杯。 4、可提供 500V 电压的电源。 5、用于染色和脱色的容器。 6、用于加热的电炉子 7、手套一副 8、微量进样器 （二）试剂： 1、二次蒸馏水。 2、30%丙烯酰胺混合溶液。 3、1.5mol/L 的 Tris（pH=8.8）和 0.5mol/L 的 Tris（pH=6.8）。 4、10%的 SDS（十二烷基硫酸钠）溶液和 10%的过硫酸铵溶液。 5、TEMED（四甲基乙二胺）规范品。 6、染色液、脱色液和电极缓冲液 7、蛋白 Marker 系列（Marker、Loading buffer，）