革兰氏染色（）是一种差异细菌染色技能，可根据细菌的细胞壁成分将其区分为革兰氏阳性和革兰氏阴性菌，是细菌学中运用最广泛和最重要的染色技能。革兰氏染色技能由丹麦细菌学家汉斯·克里斯蒂安·格拉姆（Hans Christian Gram）开发运用，开始是用来判定引起肺炎的细菌，后来成为将区分革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的盛行办法。革兰氏染色是辨认和调查细菌的一般测验。染色运用结晶紫作为主染色剂，檫木碱作为复染剂。染色后具有革兰氏阳性细胞壁的细菌将出现紫色，革兰氏阴性菌则会失掉原染色并吸收复染剂出现粉赤色或赤色。

  细菌是单细胞微生物，被归类为原核细胞生物。它们的内部结构相对比较简单，主要由荚膜、细胞壁、细胞质、核糖体、DNA、菌毛和鞭毛组成。确认细菌的革兰氏特性，要运用到革兰氏染色技能。除了染色特性，革兰氏阳性和阴性菌在每个方面都存在必定的差异，如表所示：

  在这两者中，革兰氏阴性细菌的损害更大，因为它们比革兰氏阳性菌愈加固执，难以损坏，假如感染是由革兰氏阴性菌引起，一般要合作运用联合疗法，尤其是具有两层机制效果的抗生素，以彻底清除有害细菌。

  因为细菌细胞壁结构和组成成分的差异，细胞壁上有一层厚厚的肽聚糖的细菌会反抗主染色剂脱色，出现紫色。肽聚糖层较薄、交联较少的细菌在脱色进程中会失掉主染色剂，而取得复染色剂，出现粉赤色或赤色。

  在结晶紫染料溶液中，分子会解离成 CV 和 Cl+- 离子。这些离子很简单穿透阳性和阴性细菌的细胞壁成分。CV 离子与细胞壁中带负电荷的成分相互效果。当参加革兰氏碘媒染剂时，碘（I+- 或 I-3 离子）与 CV 离子相互效果，在细胞质、细胞膜和细胞壁层内构成 CV-I 复合物。

  当参加脱色剂（乙醇或乙醇与丙酮的混合物）时，它会与细胞壁中的脂质产生效果。革兰氏阴性细菌细胞壁的外膜被溶解，显露肽聚糖层。因为细胞壁中的肽聚糖层较薄，交联较少，因而会出现渗漏。这导致细胞失掉大部分 CVI 复合物。而革兰氏阳性细菌没有外膜，肽聚糖层较厚，交联度较高。因而，脱色溶液会使肽聚糖层脱水，将一切的 CVI 复合物困在细胞壁，细菌就会坚持结晶紫的紫色染色。

  当添加复染剂（带正电荷的番红素）时，其会与革兰氏阴性细胞壁和膜中带负电荷的游离成分相互效果，细菌变成粉赤色/赤色。但是，革兰氏阳性菌因为 CVI 复合物和脱水，导致细胞壁内部没有番红的进入空间，不能将其染成赤色或粉赤色，仍旧出现紫色。

  试验细菌、革兰氏染色试剂盒（试剂）、载玻片、接种环、本生灯、染色架、洗瓶（或自来水）、带100倍物镜的显微镜（复合显微镜）、革兰氏染色试剂

  结晶紫是一种浓紫色的有机物，化学上被称为三苯基甲烷染料，又称六甲基对玫瑰苯胺氯化物或甲基紫10B或龙胆紫。其色彩取决于溶解介质的pH值，在pH 值在1以下时呈黄色，在pH值为1-2时呈绿色，在中性pH值下呈紫色（深蓝紫色），在高碱性pH值下呈无色。结晶紫常被用于染色纺织品、纸张和纤维、圆珠笔以及洗涤剂、化肥等化学品。在微生物学和分子生物学中，它常被用于细菌染色、组织学玻片染色、DNA染色等。一同，它还具有抗菌和抗真菌特性，因而可被用于灭菌和消毒。在革兰氏染色中，它作为原染剂被用作CV+和Cl-离子化的碱性染料，为革兰氏阳性菌供给紫色。

  革兰氏碘是碘和碘化钾的水溶液，在革兰氏染色中用作媒染剂。它与 CV+ 相互效果并构成 CVI 复合物，该复合物被困在革兰氏阳性细胞壁的脱水肽聚糖层中。

  脱色剂为乙醇或丙酮和乙醇（95%）按体积比为1：1装备的混合物，脱色液溶解革兰氏阴性细胞壁外膜中的脂质，添加其渗透性。而在革兰氏阳性细胞壁中，脱色剂使肽聚糖层脱水，并将 CVI 复合物捕获在细胞内。

  番红素是一种赤色复染剂，用于在革兰氏染色技能中对脱色的革兰氏阴性细胞进行从头染色。它是一种碱性染料，与细胞壁和膜的带负电荷的成分相互效果。除番红素外，稀卡波尔品红溶液也可被用作复染剂。

  结晶紫制备：在 100 毫升乙醇（95%）中参加 20 克 85% 的结晶紫染料，充沛混合溶解；在 100 毫升蒸馏水中参加 1 克草酸铵，充沛混合溶解；在 10 毫升蒸馏水中参加 1 毫升结晶紫原液，再参加 40 毫升草酸盐原液；溶液室温放置 24 小时，保存在深色瓶中备用。

  革兰氏碘制剂：将 1 克碘和 2 克碘化钾溶解在 300 毫升蒸馏水中，恰当混合直至碘溶解，保存在深色瓶备用。

  番红素：将2.5克番红素与100毫升 95%乙醇混合，将上述溶液10毫升与蒸馏水90毫升混合。

  卡波尔-品红：将3克碱性品红溶解在100毫升 95%乙醇中，将5ml液体苯酚与95毫升蒸馏水混合，制成5%苯酚溶液，将10毫升碱性品红溶液与100毫升5%苯酚溶液混合，室温下静置 24 小时，存放在深色瓶子中。

  假如培育物在培育皿或歪斜的培育皿上，则在载玻片中心滴一滴水，然后用无菌接种环移取少数菌落并与水滴一同悬浮。

  让涂改片风干，然后经过加热固定。固守时应运用微火。玻片必须在受热均匀，以防过热。加热会将细菌细胞固定在载玻片上，避免它们被冲走。

  将结晶紫溶液注入固定涂片，30 - 60 秒后，倒掉结晶紫溶液并用活动的清水冲刷。

  在涂片上滴加革兰氏碘溶液，让碘溶液逗留 30 - 60 秒，倒掉剩余的碘，用活动的清水冲刷，甩干涂片上剩余的水。

  用脱色液对涂片进行脱色，直至呈通明状流下。或许参加几滴脱色溶液，悄悄摇晃，5 秒钟后用蒸馏水冲刷。

  将带有革兰氏染色风干涂片的载玻片放在复合显微镜的载物台上，并用载物台夹固定。

  移动载物台，将光线聚集在涂改物上，对准 10 倍物镜并运用粗调旋钮聚集涂改。

  将物镜更改为 40 倍并运用微调旋钮对焦，旋转鼻梁，使污点落在 40 倍和 100 倍物镜之间。

  将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，用于试验室确诊，判定病原体，研讨细菌形状等

  涂片太厚或太粘稠或许会保存过多主染色，使辨认革兰氏染色反响变得困难，革兰氏阴性菌或许没办法正常脱色。

  专性厌氧菌，如梭状芽胞杆菌、葡萄球菌和链球菌等产毒素微生物或许会破标本中的白细胞。