染色缓冲液（BSA）的配制：PBS含有1% FBS和0.09% NaN3，置于冰上或4度冰箱备用。准备单细胞悬液：淋巴组织、骨髓、血液或培养的细胞。用冰染色缓冲液洗细胞2次，离心细胞，用冰染色缓冲液重悬细胞，使终浓度为2×107细胞/ml。各取50ul（106细胞）细胞悬液到2个圆底的Ep管中。根据抗体说明书在其中1个Ep管中加入合适的抗体量，另外1个加入同型对照抗体，冰上避光孵育20分钟（建议每5分钟轻轻混匀，以免细胞沉积）。根据荧光抗体的亲和力适当延长染色时间。用1ml染色缓冲液洗2次去除未结合的抗体，300×g离心5分钟，每次离心后小心吸取上清。用适量染色缓冲液（如500ul）重悬细胞。流式细胞仪分析染色结果（不超过4小时）。如果暂时无法检测，也可以将染色后的细胞用4%多聚甲醛固定后，避光储存在4度。固定后的细胞可以保存zui多一个星期。......

  数据显示：FCM的数据显示方式包括单参数直方图、二维点图、二维等高图、假三维图和列表模式等。直方图是一维数据用作最多的图形显示形式，既可用于定性分析，又可用于定量分析，形同一般X—Y平面描图仪给出的曲线。根据选择放大器类型不同，坐标可以是线性标度或对数标度，用“道数”来表示,实质上是所测的荧

  流式细胞仪在使用前，甚至在使用的过程中都要精心进行调试，以保证工作的可靠性和最佳性。调试的项目主要是激光强度、液流速度和测量区的光路等。激光强度：除调整反射镜的角度以调整到所需波长的激光出光外，还要结合显示屏上的光谱曲线使激光的强度输出为最大。液流速度：可通过操作台数字显示监督，调节气体压力大小以获

  流式细胞仪主要由四部分所组成。它们是：流动室和液流系统；激光源和光学系统；光电管和检测系统；计算机和分析系统。上图为其结构示意图。

  指标为了表征仪器性能，往往依据使用目的和要求而提出几个技术参数或指标来定量说明。对于流式细胞仪常用的技术指标有荧光分辨率、荧光灵敏度、适用样品浓度、分选纯度、可分析测量参数等。荧光分辨率强度一定的荧光在测量时是在一定道址上的一个正态分布的峰，荧光分辨率是指两相邻的峰可分辨的最小间隔。通常用变异系数（

  调试和校准流式细胞仪在使用前，甚至在使用的过程中都要精心进行调试，以保证工作的可靠性和最佳性。调试的项目主要是激光强度、液流速度和测量区的光路等。激光强度：除调整反射镜的角度以调整到所需波长的激光出光外，还要结合显示屏上的光谱曲线使激光的强度输出为最大。液流速度：可通过操作台数字显示监督，调节气体压

  流式细胞仪可一起进行多参数测量，信息大多数来源于特异性荧光信号及非荧光散射信号。测量是在测量区进行的，所谓测量区就是照射激光束和喷出喷孔的液流束垂直相交点。液流中央的单个细胞经过测量区时，受到 激光照射会向 立体角为2π的整体空间 散射光线，散射光的 波长和入射光的波长相同。 散射光的强度及其空间分

  流式细胞仪的数据显示方式有如下几种：（一）单参数直方图单参数直方图是一维数据用得最多的图形显示形式，既可用于定性分析，又可用于定量分析，形同一般X-Y平面描图仪给出的曲线。根据选择放大器类型不同，横坐标可以是线性标度或对数标度。用“信道”来表示，实质上是所测的荧光或散射光的强度。纵坐标一

  流式细胞仪在使用前，甚至在使用的过程中都要精心进行调试，以保证工作的可靠性和最佳性。调试的项目主要是激光强度、液流速度和测量区的光路等。激光强度：除调整反射镜的角度以调整到所需波长的激光出光外，还要结合显示屏上的光谱曲线使激光的强度输出为最大。液流速度：可通过操作台数字显示监督，调节气体压力大小以获

  流式细胞仪主要是由流动室和液流系统；激光源和光学系统；光电管和检测系统；计算机和分析系统四部分所组成。1.流动室和液流系统。流动室由样品管、鞘液管和喷嘴等组成，常用光学玻璃、石英等透明、稳定的材料制作。设计和制作均很精细，是液流系统的心脏。样品管贮放样品，单个细胞悬液在液流压力作用下从样品管射出；鞘液

  一、开机程序1、检查稳压器电源，打开电源，稳定5分钟。2、 打开储液箱，倒掉废液， 并在废液桶中加入400ml漂白水原液。打开压力阀，取出鞘液桶，将鞘液桶加至4/5满(一般可用三蒸水，做分选必须用PBS 或FACSFlow)，合上压力阀。确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。3、将FACSCali

  1. 减少非特异荧光染色（1）细胞的活性和状态：流式细胞仪不但可探测细胞表面的荧光，也可探测细胞内的荧光。因此，如果要检测细胞表面的分子，一定要保证细胞的活性，还应尽可能保持细胞静止，通常在4度做相关操作。否则，荧光抗体进入死细胞内，会产生非特异结果。（2）封闭抗体的应用是必不可少的，因为

  流式细胞仪（Flow cytometer ）是对细胞进行自动分析和分选的装置。它能够迅速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量，并能够准确的通过预选的参量范围把指定的细胞亚群从中分选出来。多数流式细胞计是一种零分辨率的仪器，它只能测量一个细胞的诸如总核酸量，总

  流式细胞仪，就是将检测器换成了光电系统，此时，就不用人眼去观察，而用这个检测系统来进行仔细的检测。它可以分析细胞表面的一些抗原的表形，而且还可以分析细胞内的一些抗原以及抗体的表形。如果分析细胞内的一些物质的时候，要把细胞打口，然后让这些物质能够穿过细胞膜，然后跟细胞内的物质发生特异性结合，我们就可以检测细

  流式细胞仪的数据显示方式有如下几种： （一）单参数直方图 单参数直方图是一维数据用得最多的图形显示形式，既可用于定性分析，又可用于定量分析，形同一般X-Y平面描图仪给出的曲线。根据选择放大器类型不同，横坐标可以是线性标度或对数标度。用“信道”来表示，实质上是所测的荧光或散射光的强度。纵

  流式细胞仪的分选功能是由细胞分选器来完成的。总的过程是：由喷嘴射出的液柱被分割成一连串的小水滴，根据选定的某个参数由逻辑电路判明是否将被分选，而后由充电电路对选定细胞液滴充电，带电液滴携带细胞通过静电场而发生偏转，落入收集器中；其它液体被当作废液抽吸掉，某些类型的仪器也有采用捕获管来进行分选的。稳定

  流式细胞仪的数据显示方式有如下几种：（一）单参数直方图单参数直方图是一维数据用得最多的图形显示形式，既可用于定性分析，又可用于定量分析，形同一般X-Y平面描图仪给出的曲线。根据选择放大器类型不同，横坐标可以是线性标度或对数标度。用“信道”来表示，实质上是所测的荧光或散射光的强度。纵坐标一般表

  荧光补偿是指修正荧光光学信号在探测器之间相互渗漏并被数字化检测的过程。自单激光双色分析出现后，此过程变得十分重要。每种荧光素分子都具有自身的光谱发射范围。这些发射光谱之间有相互叠加，在某些情况下此现象十分明显。举例来说，如下图为FITC与PE荧光发射光谱的叠加情况。在一个双探测器系统中，可

  二维点图以双参数显示结果，每个点表示一个或多个细胞。图5-6为阴性对照图，用于设定阴性对照边界，全图划分为四个象限，以区分阴性细胞、单阳性细胞以及双阳性细胞。左下象限（LL）为双阴性细胞，左上象限（UL）为Y轴阳性细胞（CD19 PE），左下象限（LR）为X轴阳性细胞（CD3 FITC），右上象限（

  四、所需试剂1、细胞表面染色的荧光标记的单抗试剂依据实验要选择特殊表面标志CD45圈定所有淋巴细胞CD3 圈定T淋巴细胞CD4 圈定T辅助淋巴细胞亚群CD8 圈定T抑制淋巴细胞亚群CD19/或CD20圈定B淋巴细胞CD56圈定NK淋巴细胞CD14圈定单核细胞2、荧光标记的细胞因子抗体：R&D提供F

  流式细胞仪是集单克隆抗体、荧光化学、激光、计算机等高技术发展起来的一种先进仪器，已大范围的应用于免疫学、生物化学、生物学、肿瘤学以及血液学等方面的研究和临床常规工作。其中检测人白细胞表面标志可对白血病、淋巴瘤作用迅速正确的诊断，对淋巴细胞群和亚群进行精确分类，还能分离纯化某一群或亚群细胞。活细胞免疫荧光

  流式细胞仪（flow cytometry，FCM）是集激光设备、电子信息技术、光学精确测量技术性、电子信息技术及其体细胞莹光技术性、单克隆抗体技术性为一体化的新式新科技仪器设施，具备敏感度高、可重复性好、非特异强、方式灵便、剖析更快等优势。 一、流式细胞仪的基础主要用途 流式细胞仪能

  实验方法原理 其原理主要是根据细胞凋亡时在细胞、亚细胞和分子水平上所发生的特征性改变。这些改变包括细胞核的改变、细胞器的改变、细胞膜成分的改变和细胞形态的改变等，其中细胞核的改变zui具特征性，最重要的包含以下几个方面：1. 细胞核的改变由于凋亡细胞核的改变，造成各种染色体荧光染料对凋亡细胞DNA可染性

  通过预设的获取模式文件进行样品分析   1．从苹果标志中选择CELLQUEST，新视窗出现后从File指令栏中选择Open，打开预设的获取模式文件。  2．从屏幕上方Acquire指令栏中，选取Connect to Cytometer进行电脑和仪器的连机。将出现的Acquisiton   Contr

  六、流式检测细胞染色基本过程（以全血为例）1、   收获细胞：肝素钠抗凝的静脉血，按1：1与培养基混匀，加刺激剂，同时加蛋白转运抑制剂（参照说明书）， 混匀后，37℃，5%二氧化碳培养4-6小时2、   阻断Fc受体：用于消除非特异性的结合染色①      在小鼠，可使用纯化的FcII/III受体的

  流式细胞仪数据的获取必须是在仪器性能的校准均合格的基础上进行。由于流式细胞仪是基于对散射光信号和荧光信号做多元化的分析的仪器，因此，仪器散射光和荧光信号的光电倍增管电压、增益、颜色补偿等参数的设定直接影响结果。同型对照的设定特别的重要。同型对照是指与单抗种宿来源相同、亚型相同、标记荧光素相同的未免疫动物

  问题一：流式细胞仪结果图如何看 流式细胞仪检测的都是相对荧光强度，因此一般都是用来比较两个或以上样本的荧光强度的差异。而荧光强度则是由荧光标记抗体或者其他荧光染料根据不同目的来选用的。你可以贴一组具体的图来，我可以给你一些指导。问题二：怎样看流式细胞仪淋巴细胞分析结果 最常见的是分析CD4， CD8

  1、流式细胞仪的分析速度：一般流式细胞仪每秒检测1000～5000个细胞，大型机可达每秒上万个细胞。2、流式细胞仪的荧光检验测试灵敏度：一般能测出单个细胞上＜600个荧光分子，两个细胞间的荧光差＞5%即可区分。3、前向角散射（FSC）光检测灵敏度：前向角散射（FSC）反映被测细胞的大小，一般流式细胞仪能

  中国报告大厅网讯，流式细胞仪是一种用于分析和分选细胞或颗粒的仪器。流式细胞仪主要分布在北美和欧洲地区，国内流式细胞仪市场规模也在逐渐扩大。以下是2024年流式细胞仪市场分析。流式细胞仪市场规模全球流式细胞仪市场预计将从2023年的52亿美元增长到2029年底的83亿美元，2024年至20

  一、指标为了表征仪器性能，往往依据使用目的和要求而提出几个技术参数或指标来定量说明。对于流式细胞仪常用的技术指标有荧光分辨率、荧光灵敏度、适用样品浓度、分选纯度、可分析测量参数等。二、荧光分辨率强度一定的荧光在测量时是在一定道址上的一个正态分布的峰，荧光分辨率是指两相邻的峰可分辨的最