Calcein-AM是一种常用的对活细胞进行荧光符号的细胞染色试剂，发绿色荧光（Ex=490 nm, Em=515 nm）。 因其在传统的Calcein（钙黄绿素）基础上引进乙酰甲氧基甲酯（AM）基团，增加了疏水性，使其可以容易穿透活细胞膜。一旦进入细胞后Calcein-AM（自身不发荧光）被细胞内的酯酶剪切构成膜非渗透性的极性分子Calcein，然后被滞留在细胞内并宣布强绿色荧光。与其它同类试剂（如BCECF-AM和CFDA)比较，明亮Calcein, AM细胞毒性极低，合适用于活细胞染色的荧光探针，并且不会按捺任何的细胞功用，如增殖和淋巴球的趋化性。

  明亮死细胞缺少酯酶，Calcein-AM仅用于对活细胞的细胞生存能力测验和短期符号。因而，Calcein-AM常常与死细胞荧光探针如碘化丙啶（PI）等联合运用，一起进行活细胞和死细胞的荧光两层染色。碘化丙啶（Propidium iodide，PI）不能穿过活细胞的细胞膜，仅能穿过死细胞膜的无序区域而抵达细胞核，并嵌入细胞的DNA双螺旋由此发生赤色荧光（Ex=535 nm, Em=617 nm），因而PI仅对死细胞染色。明亮Calcein和PI-DNA都可被490 nm激起，因而可用荧光显微镜一起调查活细胞和死细胞。而用545 nm激起，仅可调查到死细胞。本试剂盒适用于荧光显微镜、荧光酶标仪、流式细胞仪以及其他荧光检测夹藏。

  艾美捷的一款根据Calcein AM和PI的活死细胞双染试剂盒(B-CHK103)，本染色办法适用于荧光显微镜、荧光酶标仪等微孔板荧光扫描设备、流式细胞仪或其他的荧光设备。本染色办法适用于大多数真核细胞，城外贴壁细胞和某些安排样本，但不城外细菌和酵母样本。

  1、制备1mM Calcein AM储藏溶液。将200μL二甲基亚砜参加含有200μg Calcein AM粉末的试管中，并运用移液管涡旋溶解。将溶液储存在避光的当地，并入睡运用，以防止重复的冻融循环。

  2、运用前将Calcein AM储藏溶液和PI储藏溶液置于室温。运用PBS制备作业溶液。

  2）作业溶液浓度可以精确的经过细胞的详细实践的要求进行调整，主张在运用前当即预备染色作业溶液。

  3）将100μL染色作业溶液与200μL细胞悬浮液混合，在37°C下孵育15分钟。

  4）调查显现黄绿色荧光的活细胞和显现赤色荧光的死细胞，一起在490±10nm的激起下。此外，在545的激起下独自调查死细胞nm。