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电泳过程-配方
发表时间: 2024-11-13 20:48:14 作者: 稀释液
(8)剥离胶:把电泳槽取出,两块板拿下来,用刮片从长短玻片中心翘起,再把浓缩胶刮掉,取下。
(9)染色:将别离胶放于考马斯亮蓝染色液中染色1 h,完成后取出胶条并用水洗掉染液。
(1)拼装胶架:玻璃板对齐后放入夹中卡紧。然后笔直卡在架子上预备灌胶。(操作时要使两玻璃对齐,避免漏胶。)
(2)灌制别离胶:制造15%别离胶,参加TEMED后当即摇匀即可灌胶。灌胶时,可用3 mL的吸管汲取适量的胶沿玻璃放出,待胶面升到绿带中心线高度时即可。然后胶上加一层水液封。当水和胶之间有一条折射线时,说明胶已凝结。数分钟后使胶充沛凝结即可倒去胶上层水并用吸水纸将水吸干。
(5)样品处理:取50μL Loading Buffer参加等体积的蛋白样品/含有蛋白的菌体破碎上清,200μL Loading Buffer于菌体沉积/含有蛋白的菌体破碎沉积,混合均匀。沸水浴煮10分钟。
(6)加样:用移液枪取处理过的样品溶液20μL,小心肠顺次参加到各凝胶凹形样品槽内,并参加蛋白marker作对照。
(3)灌制浓缩胶:制造5%的浓缩胶,参加TEMED后当即摇匀即可灌胶,将剩下空间灌满浓缩胶然后将梳子刺进浓缩胶中,灌胶时也要使胶沿玻璃板流下避免胶中有气泡发生,插梳子时要使梳子坚持水平。待到浓缩胶凝结后,用水冲刷一下浓缩胶。
(4)装置电泳槽:将装好玻璃板的胶模框平放在仰放的贮槽框上,其下缘与贮槽框下缘对齐,放入电泳槽内,倒入电泳缓冲液内液面没过胶体界面,外液面至胶槽高度1/3处。两手别离捏住梳子的两头竖直向上悄悄将其拔出。
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