1、先称枯燥（事前放入温箱枯燥过夜）瑞氏染料放置乳钵内，用乳棒悄悄敲碎染料成粉末，再行研磨至听不到研芝麻声即呈细粉末，加少量甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸内显“一面镜”光泽，而无染料粉粒冷静。

  2、再加较多量甲醇研磨呈一面镜亮光，静置顷刻，将上层液体倒入一清洁贮存瓶内（最好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重复数次，至乳钵内染料及甲醇用完停止，摇匀，密封瓶口。

  3、存室温暗处，贮存愈久，则染料溶解、分化就越好，一般贮存3个月以上为佳。

  1、染色对氢离子浓度是非常灵敏的，据调查pH值的改动，可使蛋白质与染料构成的化合物从头离解。

  2、缓冲液须坚持必定的pH使染色安稳，PBS的pH一般在6.4~6.8，

  3、偏碱性染料可与缓冲液中酸基起中和作用，偏酸性染料则与缓冲液中的碱基起中和作用，使pH稳定。