本专利技术涉及一种碱性肽的检测的新方法。更详细地，本专利技术涉及的方法如下将疑似含有碱 性肽的试样和含有变性的白蛋白的试剂混合，检测出因碱性肽与变性的白蛋白的复合物而 产生的浑浊，以此检测出碱性肽。此外，本专利技术还涉及一种用于该检测的新方法的碱性肽检测用 试剂。

  人们已知，在患有特定病的生物中，特定的碱性肽的血中浓度与健康时不同。这种碱性 肽如有生长素释放肽(ghrelin)、脑尿钠肽(BNP)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、心房利钠肽 (ANP)、以及缓激肽等，在临床检查领域，这些碱性肽被视为疾病的标志物。比如，已知在患 有重症心力衰竭的患者、以及患有严重胃癌的患者中，作为碱性肽之一的生长素释放肽在 血浆中的浓度下降。此外，BNP的血中浓度是心力衰竭的重要临床指标，BNP也被用作检查 标志物。现在都是用酶免疫分析法、电化学发光免疫测定法等免疫学方法测定这些碱性 肽。在这种免疫学方法当中，使用特异性地识别上述碱性肽并与其结合的抗体进行测定。用 此方法，要检测出抗体与碱性肽的复合物，有必要进行使标记物与该复合物结合的步骤，因此 操作繁琐。另一方面，Dennis和Lowenthal等人公开了一种碱性肽的检测的新方法,与免疫测定 法不同，该办法能够省略标记物结合步骤。然而，该方法需要高价的、大型的质量分析仪、表 面等离子体共振分析仪等，因此很难说是一种能够通用普及的方法。此外,Dennis和Lowenthal等人为了发现病情指标、探明药理作用、以及开发药物 传输系统等，还对天然存在的白蛋白(未变性的白蛋白)与碱性肽之间的结合进行了研究。所谓白蛋白是指蛋清、血清或乳汁等物质中天然含有的蛋白质。以血清白蛋白为 例，已知其生理机能是调节血液的渗透压，与脂肪酸、血素色、胆红素等血液中的代谢产物、 药剂等化合物、以及特殊肽等结合，并在血液中循环。比如Baczynskyj等人暗示了已知的血中荷尔蒙，即缓激肽与BSA (牛血清白蛋 白)结合的可能性。Muramoto等人报告称，血中肽激素ACTH会与牛血清白蛋白(BSA)结合。 在先技术文献非专利文献非专利文献 I :Muramoto K.等，《生物化学》(Biochemistry) , vol. 20, 3380-3385 (1981)非专利文献 2 Baczynskyj L.等，《质谱快报》(Rapid Commun. Mass Spectrom.), vol. 8,280-286 (1994)非专利文献3 :Dennis MS等，《生物化学期刊》(J. Biol. Chem. ) , vol. 277, 35035-35043 (2002)非专利文献 4 :Lowenthal MS 等，《临床化学》(Clin. Chem. ) , vol. 51,1933-1945(2005)。

  专利技术要解决的课题本专利技术人从热力学平衡理论的方面出发，对碱性肽和未变性白蛋白的结合、特别是二 者通过结合相互造成的分子结构变化的机制进行了研究。在此，所谓热力学平衡理论是指 用表示结合强弱(亲和性)的解离常数(Kd值)、以及反映结合所伴随的别构性结构变化的协 同性(希尔系数)这些明确的数值，描述溶液中实际发生的分子间结合。在这一研究过程中，本专利技术人承认，如上述Lowenthal等人的报告所记载的，碱性 肽会和未变性白蛋白结合。Lowenthal等人的检测的新方法是依赖于质量分析仪的机械物理学 方法。在该检测的新方法中，先将碱性肽和未变性白蛋白的混合物固定在质量分析仪的试样固 定用高分子基板上，然后将其展开。即，在该检测的新方法中，碱性肽和未变性白蛋白两者均处 于脱离实际的溶液平衡的状态下，仅有一部分分子团可以被检测出。相对而言，本专利技术人则是将碱性肽和未变性白蛋白始终静置于溶液中，并对他们 自身的自然结合，即实际的溶液平衡进行追踪。与上述在先技术不同，本专利技术人探讨的方法 是利用此溶液平衡，检测出碱性肽、或碱性肽与未变性白蛋白的复合物。然而，在上述探讨过程中，本专利技术人发现了在先技术中未报告的现象，即碱性肽与 未变性白蛋白的结合的亲和性很弱。因此，在此检测的新方法中，其检验测试灵敏度无法令人满意。因此，要检测出上述复合物，需要另行使用标记物检测步骤，或是想办法促进上述 溶液平衡中的结合亲和性。本专利技术的特征之一在于其符合上述需求。因此，本专利技术的目的是提供一种检测方 法，在该方法中，无需进行标记物的结合等繁琐的操作，即可简便、快捷地检测出碱性肽。本 专利技术的目的还在于提供一种用于该检测的新方法的碱性肽检测用试剂。解决课题的手段本专利技术人发现，将含有碱性肽的试样、以及变性牛血清白蛋白溶液混合后，变性白蛋白 与碱性肽结合，形成了复合物，并在混合液中产生浑浊，而且，此浑浊的程度随着试样中碱 性肽的浓度而升高,本专利技术人据此完成了本项专利技术。因此，本专利技术提供一种碱性肽的检测的新方法，包括以下步骤(1)将疑似含有碱性肽的试样、以及含有变性白蛋白的试剂进行混合，以此形成碱性肽 与变性白蛋白的复合物，(2)检测步骤(1)生成的混合液中的浑浊。本专利技术还提供一种含有变性白蛋白的碱性肽检测用试剂。专利技术效果用本专利技术提供的方法和该方法所使用的试剂，不必进行标记物结合等繁琐的操作，即 可简便、快捷地检测出碱性肽。附图说明图1是使用未变性BSA溶液、以及含有热变性BSA的本专利技术的试剂检测ACTH部分肽时， 0D测定值-肽浓度的示图2是将0分钟、5分钟、15分钟、60分钟、以及120分钟热变性的BSA溶液作为试剂， 检测ACTH部分肽时，0D测定值-肽浓度的示图；图3是使用含有热变性BSA的本专利技术试剂检测含有核酸的试样、以及不含核酸的试样 中的ACTH部分肽时，0D测定值-肽浓度的示图4-1为使用含有热变性BSA的本专利技术的试剂，尝试着检测a -内啡肽时，0D测定 值-肽浓度的示图4-2为使用含有热变性BSA的本专利技术的试剂，检测强啡肽A部分肽时，0D测定值-肽 浓度的示图5-1为使用含有热变性BSA的本专利技术的试剂，检测激肽原的片段时，0D测定值-肽 浓度的示图5-2为使用含有热变性BSA的本专利技术的试剂，检测ITIH4的片段时，0D测定值-肽 浓度的示图6为使用含有热变性的人血清白蛋白(HSA)的本专利技术的试剂、以及含有热变性的卵 白蛋白(0A)的本专利技术的试剂，检测ACTH部分肽时，0D测定值_肽浓度的示图7-1为使用含有热变性BSA的本专利技术的试剂，尝试着检测纤维蛋白原a时，0D测定 值-肽浓度的示图7-2为使用含有热变性BSA的本专利技术的试剂，尝试着检测C3f时，0D测定值-肽浓 度的示图7-3为使用含有热变性BSA的本专利技术的试剂，尝试着检测因子XIII时，0D测定值-肽 浓度的示图7-4是将图1的示图和图7-1至7-3的示图重叠后，0D测定值-肽浓度的示图8为含有热变性BSA的本专利技术的试剂、以及含有ACTH部分肽的试样的混合液的荧光 强度-肽浓度的示图9中，关于含有热变性BSA的本专利技术的试剂、以及含有ACTH部分肽的试样的混合液， 显示了该混合液中凝集物数量-肽浓度的示图10为使用含有热变性BSA的本专利技术的试剂，检测含血清的试样、以及不含血清的试 样中的ACTH部分肽时，0D测定值-肽浓度的示图。 具体实施例方式本专利技术的方法为包含以下步骤的碱性肽的检测的新方法。