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考马斯亮蓝G250染色液的配制方法
发表时间: 2024-12-07 03:10:21 作者: 产品中心
产品描述:属于三苯甲烷类染料,有G250和R250两种,可与蛋白质形成较强的非共价复合体,白-染料复合物的形成稳定染料携带的负电荷阴离子(如磺酸基),由此产生在膜上或者胶上肉眼可见的蓝色。考马斯亮蓝G250是Bradford法蛋白质定量试剂的主要成分,考马斯亮蓝R250多用于聚丙烯酰胺凝胶电泳后蛋白质条带的染色。
2) 标准曲线ug标准蛋白质溶液,用水补足到60ul,加3mL染色液,混匀后室温放置15分钟,至595nm处比色测定。以蛋白质含量为横坐标,A595的值为纵坐标绘制标准曲线) 测定:
该方法反应快、操作简单便捷、消耗样品少,但不同蛋白质间的差异大,标准曲线的线性不好,显色受时间和温度影响较大。考马斯亮蓝染色能力强,特别要注意比色杯的清洗。较高浓度的去污剂(Triton X-100,SDS等)、尿素和硫酸铵对测定有干扰。
将0.2g G250溶于100ml水中(需要加热至50°C促进溶解)。冷却后,加入100ml 2N H2S04。室温放置3h-过夜,然后滤纸除杂。过滤后的溶液,小心加入22.2ml 10N KOH,然后加入28.7g TCA。混匀后室温放置 3h,再过滤除杂从而获得琥珀般的棕色溶液,不含蓝色沉淀。
2)染色只需将胶*浸在此染色液中,约15 min后条带就会显示出来。几小时后染色条带的亮度和灵敏度会促进加强。
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