考马斯亮蓝（Coomassie brilliant blue）是两种类似三苯甲烷染料的总称，有G250和R250两种，结构上前者比后者多了2个甲基，命名上“G”为Green 的缩写，因G250的蓝色染料泛浅绿色；命名上“R”为Red的缩写，因R250的蓝色染料呈微赤色彩；“250”表明考马斯亮蓝的纯度。生化试验中常将考马斯亮蓝用于蛋白定量和蛋白电泳中蛋白染色。作业原理是：经过与蛋白质内的氨基和羧基基团间的静电结合效果以及范德华力，考马斯亮蓝与蛋白质构成强但非共价键衔接的复合物。蛋白-染料复合物的构成安稳染料带着的负电荷阴离子（如磺酸基），由此产生在膜上或许胶上肉眼可见的蓝色。

  考马斯亮蓝R250(Coomassie Brilliant Blue R250)更多用于电泳蛋白的染色，染色灵敏度比氨基黑高5倍，可达0.1 g蛋白。可是染色布景比较深，需求褪色后才干进行蛋白条带的调查。考马斯亮蓝G250对蛋白胶染色的灵敏度相对较差，最低检测到0.5 g蛋白。可是因其在三氯乙酸中不溶而以胶体方式存在，选择性的和蛋白质结合构成复合物，染色敏捷，上色深的蛋白质条带数秒内能够显现出来，约45 min后上色最深。并且染色布景低，不需求脱色即可进行蛋白条带的调查。因而，很合适对电泳凝胶蛋白的快速定性分析。

  考马斯亮蓝G250较多的用于溶液系统中蛋白的定量分析，即Bradford蛋白结合检测法（Bradford protein-binding assay），此办法使用的便是G250与蛋白质结合的特性，Bradford试剂（也便是酸化的G250溶液）为阳离子，主要为双质子化，溶液为赤色，其最大吸收波长（Amax）为470 nm。当与蛋白安稳结合后，G250以阳离子，非质子化的方式存在，溶液变为蓝色，最大吸收波长迁移到595 nm。蓝色阳离子方式染料的量与样本中蛋白的量成正比，因而经过直接测定595 nm的吸光度来反映蛋白量。此法的长处是G250与蛋白质结合所需的时刻较短（约2 min左右），且结合的G250-蛋白质复合物室温下约1 h内保持安稳。反响灵敏度较高，是一种十分常用的微量蛋白快速定量办法。

  将0.2 g G250溶于100 mL水中（需求加热至50C促进溶解）。冷却后，参加100 mL 2 N H2S04。室温放置3 h-过夜，然后滤纸除杂。过滤后的溶液，当心参加22.2 mL 10 N KOH，然后参加28.7 g TCA。混匀后室温放置3 h，再次过滤除杂然后取得琥珀般的棕色溶液，不含蓝色沉积。

  2）染色只需将胶彻底浸在此染色液中，约15 min后条带就会显示出来。几个小时后染色条带的亮度和灵敏度会促进加强。

  A：考马斯亮蓝G250 对蛋白胶染色的灵敏度相对较差，最低检测到 0.5 g 蛋白。但染色布景低，不需求脱色即可进行蛋白条带的调查。因而，很合适对电泳凝胶蛋白的快速定性分析。