蛋白质胶内酶切过程溶液准备考染脱色液:50mMNH4HCO3/ACN(1:1,vol/vol);银染脱色液:)6/Na2S2O3(1:1,vol/vol);铁/硫代硫酸钠掩盖液:25mM碳酸氢铵溶液;酶液:2ug分装后的promega质谱级胰酶,用160ul掩盖液充沛混和溶解;萃取液:5%甲酸/乙腈(1:2,vol/vol);二、操作过程水洗胶块2次,吸走液体;胶块脱色。考然胶块:加考然脱色液100ul(溶液的量视胶块详细巨细而定)室温脱色1h左右,直至胶块的色彩彻底褪去,吸走液体;水洗胶块2次,将脱色后的染料洗去,吸走液体;银染胶块:加银染脱色液50ul(溶液的量视胶块详细巨细而定)室温脱色5min,至胶块色彩彻底褪去;迅速将脱色液吸走,并加水停止;水洗胶块3次,至胶块变得彻底无色通明;胶块脱水。加50%ACN溶液,让胶块脱水;再加100%CAN,让胶块变白彻底脱水;别离吸走液体;复原烷基化(SDS一维电泳条带,请做此步;2D电泳点不需求此步)参加50ul10mMDTT溶液(溶于25mMNH4HCO3),56℃水浴50min;离心,吸走液体;参加50ul55mMIAA溶液(溶于25mMNH4HCO3),避光反响15min;吸走液体;参加100ul水洗胶块,将反响剩下液体吸走;胶块脱水,重复过程4;-20ul(详细视胶块巨细而定),让胶块充沛吸胀,变通明20min,再剩下1-3ul的酶液;℃水浴过夜16h;-MS剖析,则直接取酶解液上清点样做质谱即可;若做ESI-LCMS剖析则需求萃取胶内的多肽,别离加100ul萃取液,超声10min萃取两次,冷冻干燥待做LCMS;