本发明提供一种肿瘤早筛苯胺蓝染色液，检验测试过程简单，准确率高，检测通量大、速度快、时间短，检测效率高；并且降低检测成本；所述本发明有试剂A和试剂B两组；所述试剂A与试剂B的体积比为1:1；所述试剂A由1g/L的3,3,5,5‑四甲基联苯胺(TMB)、100mL/L的二甲基亚砜、400mL/L的无水乙醇、100mL/L乙酸、0.6g/L的表面活性剂、6mL/L的催化剂、0.1mol/LpH值为5的柠檬酸‑磷酸二氢钠缓冲液组成；所述试剂B为3%的过氧化氢溶液；有益效果是；抗干扰，检测准确率高；通

  (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 113310774 A (43)申请公布日 2021.08.27 (21)申请号 2.6 (22)申请日 2020.09.29 (71)申请人 连云港博奥木华基因科技有限公司 地址 222000 江苏省连云港市高新技术产 业开发区花果山大道17-1-1701-1708 室 (72)发明人 李浩蒋雪东张逸鹏李雪芹 (74)专利代理机构 连云港乐诚专利代理事务所 (特殊普通合伙) 32430 代理人 张丽 (51)Int.Cl. G01N 1/30 (2006.01) 权利要求书1页 说明书4页 附图1页 (54)发明名称 肿瘤早筛苯胺蓝染色液 (57)摘要 本发明提供一种肿瘤早筛苯胺蓝染色液，检 测过程简单，准确率高，检测通量大、速度快、时 间短，检测效率高；并且降低检测成本；所述本发 明有试剂A和试剂B两组；所述试剂A与试剂B的体 积比为1:1；所述试剂A由1g/L的3,3,5,5‑四甲 基联苯胺(TMB)、100mL/L的二甲基亚砜、400mL/L 的无水乙醇、100mL/L乙酸、0.6g/L的表面活性 剂、6mL/L的催化剂、0.1mol/L pH值为5的柠檬 酸‑磷酸二氢钠缓冲液组成；所述试剂B为3%的过 氧化氢溶液；有益效果是；抗干扰，检测准确率 高；通量大、速度快，检测时间短，检测效率高；检 测过程简单科学，检测成本低，使医院的诊断效 A 率与准确率提高。 4 7 7 0 1 3 3 1 1 N C CN 113310774 A 权利要求书 1/1 页 1.肿瘤早筛苯胺蓝染色液，所述本发明有试剂A和试剂B两组；所述试剂A与试剂B的体 积比为1:1；所述试剂A由1g/L的3,3,5,5-四甲基联苯胺(TMB)、100mL/L的二甲基亚砜、 400mL/L的无水乙醇、100mL/L乙酸、0.6g/L的表面活性剂、6mL/L的催化剂、0.1mol/L pH值 为5的柠檬酸-磷酸二氢钠缓冲液组成；所述试剂B为3%的过氧化氢溶液。 2.根据权利要求1所述的肿瘤早筛苯胺蓝染色液，其特征在于：所述试剂B为3%的过氧 化氢溶液。 3.根据权利要求1所述的肿瘤早筛苯胺蓝染色液，其特征在于：所述试剂A的制造过程， 所述第一步；先将0.1g TMB溶于10mL 二甲基亚砜与40mL乙醇中。 4.根据权利要求1所述的肿瘤早筛苯胺蓝染色液，其特征在于：所述试剂A的制造过程； 所述第二步；配制0.1mol/L pH值为5的柠檬酸-磷酸二氢钠缓冲液。 5.根据权利要求1所述的肿瘤早筛苯胺蓝染色液，其特征在于：所述试剂A的制造过程； 所述第三步；取30mL  乙酸，将步骤1所制得溶液与其混合均匀。 6.根据权利要求1所述的肿瘤早筛苯胺蓝染色液，其特征在于：所述试剂A的制造过程； 所述第四步；向步骤3中所得溶液加入0.06g表面活性剂、0.6 mL催化剂，充分搅拌使之完全 溶解。 7.根据权利要求1所述的肿瘤早筛苯胺蓝染色液，其特征在于：所述试剂A的制造过程； 所述第五步；用步骤2中所制缓冲液定容至100mL，混合均匀即配制成试剂A。 8.根据权利要求1所述的肿瘤早筛苯胺蓝染色液，其特征在于：所述试剂A与试剂B的混 合方法及步骤为：将100uL样本液、50uLA液、50uLB液依次加入酶标板中，放入酶标仪中震荡 均匀。 2 2 CN 113310774 A 说明书 1/4 页 肿瘤早筛苯胺蓝染色液 技术领域 [0001] 本发明涉及一种肿瘤筛查染色液，尤其是肿瘤早筛苯胺蓝染色液。 背景技术 [0002] 近年来，肿瘤的发病率略有提高，严重危害人们的身体健康，肿瘤是一种细胞恶性 增殖、且发展速度因人而异的慢性病，肿瘤筛查是早期发现癌症和癌前病变的重要途径。 [0003] 苯胺蓝染色液是一种局部组织细胞病理变化的检测试剂，属液体活检病理学检测 技术，应用于肿瘤早期筛查及早期诊断。 [0004] 现有的检测试剂产品在检测使用时还存在着许多需要改进的问题；首先对血液、 炎症等抗干扰能力差，如果样本中含有血红素、血红蛋白等成分，容易造成假阳性或者造成 检测结果增加等影响；现有产品多采用紫外分光光度计法的光电比色法，检测通量小，单次 只能检测1个样本，检测的时间节点为144秒，检测时间太长；检测成本高，需要购买专用进 口仪器才能检测，专用设备的价格昂贵；检测步骤复杂繁琐，工作量大，劳动力成本高。 发明内容 [0005] 为了克服现有苯胺蓝染色液的缺陷与不足，本发明提供一种肿瘤早筛苯胺蓝染色 液，检验测试过程简单，准确率高，检测通量大、速度快、时间短，检测效率高；并且降低检测成 本。 [0006] 本发明解决其技术问题所采用的技术方案是： 所述本发明有试剂A和试剂B两组； 所述试剂A与试剂B的体积比为1:1；所述试剂A由1g/L的3,3,5,5-四甲基联苯胺(TMB)、 100mL/L的二甲基亚砜、400mL/L的无水乙醇、100mL/L乙酸、0.6g/L的表面活性剂、6mL/L的 催化剂、0.1mol/L pH值为5的柠檬酸-磷酸二氢钠缓冲液组成；所述试剂B为3%的过氧化氢 溶液。 [0007] 所述试剂A的制作方法及步骤。 [0008] 第一步；先将0.1g TMB溶于10mL 二甲基亚砜与40mL乙醇中。 [0009] 第二步；配制0.1mol/L pH值为5的柠檬酸-磷酸二氢钠缓冲液。 [0010] 第三步；取30mL  乙酸，将步骤1所制得溶液与其混合均匀。 [0011] 第四步；向步骤3中所得溶液加入0.06g表面活性剂、0.6 mL催化剂，充分搅拌使之 完全溶解。 [0012] 第五步；用步骤2中所制缓冲液定容至100mL，混合均匀即配制成试剂A。 [0013] 所述试剂A的分子结构式。 3 3 CN 113310774 A 说明书 2/4 页 [0014] 所述试剂A与试剂B的混合方法及步骤为：将100uL样本液、50uLA液、50uLB液依次 加入酶标板中，放入酶标仪中震荡均匀。 [0015] 实验数据 1.产品线性相关度试验 以血红素标准品溶液作为标准溶液测得标准曲线。  浓度/(ug/L) 吸光度/Abs 100 0.426 150 0.536 200 0.672 250 0.805 300 0.913 350 1.051 400 1.154 500 1.39 800 2.154 [0016] [0017] 3. 产品稳定性试验 试验方法：取实施例A中所制的试剂A、B，在2-8℃下储存7天、30天、90天，重复准确度试 验，比较试剂稳定性变化。 4 4 CN 113310774 A 说明书 3/4 页 [0018] 本发明的的有益效果是；抗干扰，检测准确率高；通量大、速度快，检测时间短，检  测效率高；检验测试过程简单科学，检测成本低，使医院的诊断效率与准确率提高，给患者带 来 福音，促进全民健康，给个人、家庭、社会带来不可估量的有益效果。 说明书附图 图1是产品线性相关度试验曲线图。 具体实施方式 [0019] 所述具体实施例A。 [0020] 所述本发明有试剂A和试剂B两组；所述试剂A与试剂B的体积比为1:1；所述试剂A 由1g/L的3,3,5,5-四甲基联苯胺(TMB)、100mL/L的二甲基亚砜、400mL/L的无水乙醇、 100mL/L乙酸、0.6g/L的表面活性剂、6mL/L的催化剂、0.1mol/L pH值为5的柠檬酸-磷酸二 氢钠缓冲液组成；所述试剂B为3%的过氧化氢溶液。 [0021] 所述试剂A的制作方法及步骤。 [0022] 所述第一步；先将1g TMB溶于100mL 二甲基亚砜与400mL乙醇中。 [0023] 所述第二步；配制0.1mol/L pH值为5的柠檬酸-磷酸二氢钠缓冲液。 [0024] 所述第三步；取300mL乙酸，将步骤1所制得溶液与其混合均匀。 [0025] 所述第四步；向步骤3中所得溶液加入0.6g表面活性剂、6mL催化剂，充分搅拌使之 完全溶解。 [0026] 所述第五步；用步骤2中所制缓冲液定容至1000mL，混合均匀即配制成试剂A。 [0027] 所述试剂A与试剂B的混合方法及步骤为：将100uL样本液、50uLA液、50uLB液依次 加入酶标板中，放入酶标仪中震荡均匀。 [0028] 所述具体实施例B。 [0029] 所述本发明有试剂A和试剂B两组；所述试剂A与试剂B的体积比为1:1；所述试剂A 由5g/L的3,3,5,5-四甲基联苯胺(TMB)、200mL/L的二甲基亚砜、300mL/L的无水乙醇、 200mL/L乙酸、1.2g/L的表面活性剂、12mL/L的催化剂、1mol/L pH值为4的柠檬酸-磷酸二氢 钠缓冲液组成；所述试剂B为3%的过氧化氢溶液  。 5 5 CN 113310774 A 说明书 4/4 页 [0030] 所述试剂A的制作的完整过程。 [0031] 所述第一步；先将5g TMB溶于200mL 二甲基亚砜与300mL乙醇中。 [0032] 所述第二步；配制1mol/L pH值为4的柠檬酸-磷酸二氢钠缓冲液。 [0033] 所述第三步；取200mL乙酸，将步骤1所制得溶液与其混合均匀。 [0034] 所述第四步；向步骤3中所得溶液加入1.2g表面活性剂、6mL催化剂，充分搅拌使之 完全溶解。 [0035] 所述第五步；用步骤2中所制缓冲液定容至1000mL，混合均匀即配制成试剂A。 [0036] 所述试剂A与试剂B的混合方法及步骤为：将100uL样本液、50uLA液、50uLB液依次 加入酶标板中，放入酶标仪中震荡均匀。 [0037] 所述具体实施例C。 [0038] 所述本发明有试剂A和试剂B两组；所述试剂A与试剂B的体积比为1:1；所述试剂A 由0.6g/L的3,3,5,5-四甲基联苯胺(TMB)、100mL/L的二甲基亚砜、200mL/L的无水乙醇、 100mL/L乙酸、0.06g/L的表面活性剂、3mL/L的催化剂、0.01mol/L pH值为6的柠檬酸-磷酸 二氢钠缓冲液组成；所述试剂B为3%的过氧化氢溶液。 [0039] 所述试剂A的制作的完整过程。 [0040] 第一步；先将0.6g TMB溶于10mL 二甲基亚砜与200mL乙醇中。 [0041] 第二步；配制0.01mol/L pH值为6的柠檬酸-磷酸二氢钠缓冲液。 [0042] 第三步；取100mL乙酸，将步骤1所制得溶液与其混合均匀。 [0043] 第四步；向步骤3中所得溶液加入0.06g表面活性剂、3mL催化剂，充分搅拌使之完 全溶解。 [0044] 第五步；用步骤2中所制缓冲液定容至1000mL，混合均匀即配制成试剂A。 [0045] 所述试剂A与试剂B的混合方法及步骤为：将100uL样本液、50uLA液、50uLB液依次 加入酶标板中，放入酶标仪中震荡均匀。 6 6 CN 113310774 A 说明书附图 1/1 页 图1 7 7

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