技术领域 [0001] 本发明属于蛋白质分析检测技术领域，特别是免脱色聚丙烯酰胺凝胶蛋白快速染 色液、免脱色聚丙烯酰胺凝胶蛋白快速染色液制备方以及免脱色聚丙烯酰胺凝胶蛋白快速 染色液的使用方法。

  背景技术 [0002] 聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳技术已成为分子生物学实验中最常用的蛋白质分析 检测的新方法。蛋白质经过电泳分离后，在凝胶中能够最终靠几种染色方法检验测试，如考马斯蓝染色 法(Coomassie Brilliant Blue CBB)、银染和荧光染色法等。 [0003] 银染是最敏感的蛋白染色方法之一，可以检测纳克水平蛋白 ，但其缺点是操作难 度大，重复率低。此外，与传统的考马斯蓝染色相比 ，银染色的质谱(MS)相容性更差，因为它 在敏化溶液中含有戊二醛。它也被认为是一种与MS不相容的方法。 [0004] 荧光染色也可以 在纳克水平上检 测蛋白 质，无需特殊技术方面的要求。目前 ，SYPRO orange、SYPRO red、Deep Purple和Flamingo是蛋白质组学研究中常用的荧光染色剂。然 而 ，荧光染色试剂价格昂贵 ，且需要相对较长的处理时间。它还需要特殊的 设备 ，如荧光成 像扫描仪。 [0005] 尽管银染的灵敏度较高，各种荧光检测的新方法的动态范围广，但考马斯亮蓝染色法仍 是电泳分离蛋白最常用的检测技术。CBB染色在1963年首次用于在醋酸纤维素片上染色蛋 白质。1965年Meyer等，将此方法用于聚丙烯酰胺凝胶电泳。CBB染色具有以下优点:成本低， 可直观观察 ，简单易操作 ，便于图 像采集扫描程序 ，比 银染色更适合定量分析 ，可进行快速或 高灵敏度染色。 [0006] 经典的CBB染色法：需要先做固定，再进行染色和脱色。固定液，染色液和脱色液 成分复 杂且含有对身体有害的甲 醇 、冰醋酸等。该方法的 灵敏度不高 ，检 测下限 仅为200‑ 500ng，背景较高，而且整一个完整的过程时间比较久。001046709报道不用甲 醇、乙 酸等有害物 质，但是需要染色前将凝胶放入水中 ，微波炉加热漂洗 ，染色时也需要放 入微波炉，操作繁琐。CN 109520804 B报道染色液中加入木寡糖，染色迅速；染色后不需要 脱色液脱色，但任然需要用蒸馏水漂洗30分钟，至凝胶基本无背景。 [0007] 本发明提供一种无甲醇、冰醋酸等对人体有害于人体健康的物质；无需固定，染色快，灵敏度高， 且染色后不需脱色液脱色也不需蒸馏水漂洗即可直接观察拍照的蛋白染色液。节省操作时 间。

  本发明公开了免脱色聚丙烯酰胺凝胶蛋白 快速染色液及制备和使用方法，涉及蛋白质分析 检 测技术领域。本发明 包括如下配方 ：考马斯亮 蓝G‑250、乙醇、硫酸铵、环糊精、盐酸调pH值至 1 .2‑1 .4；制备方法有如下步骤：S1、称取硫酸 铵溶解于去离子水中 ；S2、加入环糊精 ；S3、称取 考马斯亮蓝G‑250，溶于去离子水中；加入至S2步 骤混合液中 ；S4、加入乙 醇至混合液 ；S5、加入盐 酸，调节pH值至1 .2‑1 .4；S6、定容至1L，室温避光 保存。本发明极大地提高了考马斯亮蓝染色的检 测灵敏度 ，在染色过程中 ，胶体状态的染料被排 阻 在胶外 ，很难对凝胶进行染色 ，防 止了背景的 生成 ；染色结束后无需洗脱 ，快速缩短了检 测时 间。

  (71)申请人 上海雅酶生物医药科技有限公司 地址 201100 上海市闵行区立跃路2995号4 幢101室

  2 .根据权利要求1所述的免脱色聚丙烯酰胺凝胶蛋白快速染色液，其特征是，所述环 糊精采用α‑环糊精、β‑环糊精、γ‑环糊精或其它改性环糊精中任意一种。

  3 .如权利要求1‑2任一项所述的免脱色聚丙烯酰胺凝胶蛋白快速染色液的制备方法， 其特征是，以定容1L为基准，包括如下步骤：

  S1、称取10‑100g的所述浓度的硫酸铵，溶解于600ml去离子水中，搅拌溶解； S2、加入5‑50g的所述浓度的环糊精，搅拌溶解； S3、称取0 .1‑0 .25g的所述浓度的考马斯亮蓝G‑250，溶于20ml去离子水中，搅拌溶解； 将所得溶液加入至S2步骤混合液中； S4、加入100‑200ml的所述浓度乙醇至混合液，并搅拌混匀； S5、向混合液中加入盐酸，调节pH值至1 .2‑1 .4； S6、用去离子水定容至1L，室温避光，保存至少一年。 4 .依据权利要求3所述的免脱色聚丙烯酰胺凝胶蛋白快速染色液的制备方法，其特征 在于，以定容1L为基准，包括如下步骤： S1、称取40g的所述浓度的硫酸铵，溶解于600ml去离子水中，搅拌溶解； S2、加入15g的所述浓度的α‑环糊精，搅拌溶解； S3、称取0 .15g的所述浓度的考马斯亮蓝G‑250，溶于20ml去离子水中，搅拌溶解；将所 得溶液加入至S2步骤混合液中； S4、加入150ml的所述浓度乙醇至混合液，并搅拌混匀； S5、向混合液中加入盐酸，调节pH值至1 .3； S6、用去离子水定容至1L，室温避光，保存至少一年。 5 .如权利要求1‑2任一项所述的免脱色聚丙烯酰胺凝胶蛋白快速染色液的使用方法， 其特征是，包括如下步骤：电泳结束后，将凝胶剥离玻璃板，放入染色盒中，将所述染色液 颠倒混匀后，倒入适量染色液，摇床上摇2‑10min，根据所需得到蛋白条带的清晰程度需要， 适当增加染色时间。